2020年10月17-21日（北美東部夏令時(shí)），由于疫情的影響，2020年美國(guó)生殖醫(yī)學(xué)會(huì)（ASRM）學(xué)術(shù)年會(huì)在線上召開。婦產(chǎn)科在線(www.peanutsfamily.cn)是中國(guó)最具影響力的婦產(chǎn)領(lǐng)域?qū)I(yè)學(xué)術(shù)媒體與服務(wù)平臺(tái)之一，益普生(IPSEN)是致力于學(xué)術(shù)交流的跨國(guó)醫(yī)藥企業(yè)！我們已連續(xù)4年攜手為廣大婦產(chǎn)科、生殖醫(yī)學(xué)領(lǐng)域同道帶來(lái)最新最前沿的ASRM會(huì)議資訊，并邀請(qǐng)業(yè)內(nèi)知名專家解讀會(huì)中精彩報(bào)告和摘要。今年的線上會(huì)議期間，我們將再度攜手讓廣大同道一覽國(guó)際前沿的一線觀點(diǎn)，將會(huì)議學(xué)術(shù)精粹盡收眼底！

中華醫(yī)學(xué)會(huì)生殖醫(yī)學(xué)分會(huì)主任委員、重慶市婦幼保健院黃國(guó)寧教授攜其團(tuán)隊(duì)在本次會(huì)議中不但做了分會(huì)場(chǎng)的論文報(bào)告，而且有五篇研究論文被大會(huì)收錄，可謂碩果累累。我們邀請(qǐng)到黃教授與大家分享這些研究設(shè)計(jì)和成果。

論文報(bào)告

O-95 玻璃化凍融卵子與新鮮卵子的臨床預(yù)后對(duì)比：一項(xiàng)傾向性評(píng)分匹配研究

作者：Jingwei Yang、Xiaodong Zhang、Guoning Huang

背景

卵子玻璃化冷凍是一項(xiàng)安全且有效的技術(shù)。曾有研究報(bào)道卵子玻璃化凍融之后，卵子質(zhì)量以及隨后胚胎發(fā)育不受影響；且玻璃化凍融卵子和新鮮卵子的著床率和妊娠率沒(méi)有差異。

因此，對(duì)于希望保留生殖潛能的女性而言，推薦卵子玻璃化凍融技術(shù)，同時(shí)也有利于具有營(yíng)利性質(zhì)的卵子庫(kù)的建立。然而，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)顯示卵子玻璃化凍融技術(shù)對(duì)卵子質(zhì)量和胚胎發(fā)育都造成了不利影響。卵子玻璃化冷凍技術(shù)影響胚胎形態(tài)動(dòng)力學(xué)，例如染色體分離異常，細(xì)胞器損傷或滲透壓異常，這些被證實(shí)是由于減數(shù)分裂紡錘體和細(xì)胞骨架的異常引起。然而，玻璃化冷凍技術(shù)可致人類卵子損傷的證據(jù)仍然有限。

目的

該項(xiàng)研究的目的在于比較玻璃化凍融卵子與新鮮卵子臨床移植后胚胎發(fā)育的預(yù)后差異，為卵子玻璃化凍融的方案選擇提供證據(jù)。

材料與方法

研究人群

我們回顧分析了2016年1月至2019年1月之間，重慶市婦幼保健院生殖醫(yī)學(xué)中心所通過(guò)胞漿內(nèi)單精子注射（ICSI）受精的1293例新鮮卵子和67例玻璃化凍融卵子，共1360例?；颊哌x擇卵子玻璃化冷凍是因?yàn)樵贗CSI當(dāng)天丈夫取精困難。

入組及排除標(biāo)準(zhǔn)

?患者年齡：25-40歲

?BMI：17.7-33.9kg/m2

?患者存在已知的染色體異常以及男方精液濃度＜0.1百萬(wàn)/mL將被排除。

cRNA的制備

我們獲得兩枚患者捐獻(xiàn)用于科研的正常卵子，一枚在凍融后進(jìn)行ICSI受精，另一枚直接進(jìn)行ICSI受精。為了實(shí)時(shí)可視化胚胎的分裂，用NdeI酶切pGEMHE-H2B-mCherry質(zhì)粒，使之線性化。使用mMESSAGE mMACHINE? T7 ULTRA 轉(zhuǎn)錄試劑盒 (Thermo Fisher）進(jìn)行體外轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，然后利用MEGAclear?試劑盒(Thermo Fisher)進(jìn)行RNA純化。

圖像獲取及分析

經(jīng)過(guò)ICSI的卵子，使用Leica TCS SP8 CARS共聚焦顯微鏡，在552-nm激發(fā)光下觀察每個(gè)受精卵的第一次有絲分裂。每個(gè)胚胎每30分鐘觀察1次，至少12小時(shí)，從而獲取受精卵第一次有絲分裂期間的形態(tài)學(xué)改變。

統(tǒng)計(jì)方法

連續(xù)型變量用均值±標(biāo)準(zhǔn)差及范圍表示。選擇1:1最近鄰匹配方法PSM采樣。Shapiro–Wilk檢驗(yàn)確定數(shù)據(jù)分布是否正常，T檢驗(yàn)與卡方檢驗(yàn)用于評(píng)估差異是否有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。所有的統(tǒng)計(jì)分析均使用R語(yǔ)言處理。P < 0.05被認(rèn)為具有統(tǒng)計(jì)顯著性。

結(jié)果

共1360例患者被納入研究（1293例新鮮卵子和67例玻璃化凍融卵子）。通過(guò)1:1PSM匹配其臨床特征，我們分析了130例患者（65例新鮮卵子和65例玻璃化凍融卵子）。2例玻璃化凍融卵子組患者在新鮮卵子組無(wú)法找到匹配的樣本，因此在分析過(guò)程中被排除。

圖1：在患者捐贈(zèng)的新鮮受精卵中，染色體在第一次有絲分裂后被正常分配到兩個(gè)細(xì)胞中。

圖2：在凍融卵子受精后可以觀察到，染色體出現(xiàn)分離異常，從而導(dǎo)致的有絲分裂失敗。

討論

在此項(xiàng)研究中，通過(guò)1:1PSM，觀察到玻璃化凍融卵子與新鮮卵子相比，卵裂率、著床率、4細(xì)胞胚胎率和8細(xì)胞胚胎率均降低。第一次治療嘗試失敗之后，接受再玻璃化凍融胚胎移植/FET的患者中，著床率和妊娠率在新鮮卵子組中更高。共聚焦顯微鏡分析記錄到了玻璃化冷凍卵子染色體分離失敗的情況。

我們并沒(méi)有在玻璃化凍融卵子組中觀察到分裂溝形成，這一復(fù)雜過(guò)程依賴于微絲的結(jié)構(gòu)與數(shù)量等因素。由于我們研究中的顯微圖像顯示了第一次有絲分裂期間的染色體分離異常，因此我們推測(cè)玻璃化凍融卵子對(duì)中心體和紡錘體的結(jié)構(gòu)、微管蛋白和肌動(dòng)蛋白有不利影響。但是，目前我們對(duì)玻璃化凍融卵子的影響知之甚少。

我們需要更多證據(jù)探究玻璃化冷凍技術(shù)是否對(duì)人類卵子造成影響。且需要優(yōu)化實(shí)驗(yàn)流程，從而能夠優(yōu)化卵子玻璃化冷凍。

結(jié)論

臨床數(shù)據(jù)和圖像觀察表明，卵子玻璃化冷凍對(duì)染色體分離有不利影響。胚胎發(fā)育異?？赡芘c玻璃化對(duì)卵子紡錘體、肌動(dòng)蛋白或微管蛋白造成的損害有關(guān)，但需要積累更多證據(jù)來(lái)證實(shí)。

致謝

我們非常感謝中國(guó)科學(xué)院的孫青原教授的支持并提供pGEMHE-H2B-mCherry質(zhì)粒。

壁報(bào)摘要

P-51 培養(yǎng)時(shí)間對(duì)D5凍融囊胚妊娠結(jié)局的影響

作者：Junxia Liu、Guoning Huang

目的

探究培養(yǎng)時(shí)間對(duì)D5凍融囊胚妊娠結(jié)局的影響并優(yōu)化囊胚移植策略。

方法

回顧性分析1576例移植周期第5日高質(zhì)量玻璃化凍融囊胚，患者年齡均小于38歲 。根據(jù)凍融后培養(yǎng)時(shí)間，將樣本分為2組，2-4小時(shí)（A組，n = 677）和16-20小時(shí)（B組，n = 899）。

結(jié)果

A組中著床率（64.58%），臨床妊娠率（77.99%），持續(xù)妊娠率（71.79%）均高于B組（51.35%, 67.96%, 58.39%），差異具有統(tǒng)計(jì)顯著性（P = 0.000）。A組中早期流產(chǎn)率（6.44%）顯著低于B組（11.13%, P = 0.000）。

結(jié)論

D5凍融囊胚培養(yǎng)2-4小時(shí)妊娠結(jié)局更好。

P-67 第3天胚胎培養(yǎng)基中的GDF9是胚胎質(zhì)量的有力預(yù)測(cè)因子

作者：Jing Yu Li、Guoning Huang

背景

已有研究表明卵泡液和卵丘顆粒細(xì)胞中生長(zhǎng)分化因子9（GDF9）水平可作為預(yù)測(cè)胚胎質(zhì)量的生物標(biāo)志物。然而，第3天人類胚胎培養(yǎng)基中GDF9濃度是否與胚胎質(zhì)量相關(guān)尚不清楚。

方法

研究納入70對(duì)在第3天獲得了至少4個(gè)胚胎（2個(gè)是可移植的，2個(gè)是不可移植的）的夫婦的280份培養(yǎng)基。使用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測(cè)定GDF9蛋白的含量。

結(jié)果

培養(yǎng)基中GDF9濃度的AUC為0.785，敏感性為61.31%，特異性為83.11%，可作為預(yù)測(cè)移植胚胎的可靠診斷工具。隨著胚胎質(zhì)量的下降，培養(yǎng)基中GDF9濃度顯著升高（胚胎質(zhì)量良好:377±248 pg.ml-1，一般：655±464 pg.ml-1，差：1061±646 pg.ml-1，P<0.001）。

結(jié)論

培養(yǎng)基中GDF9濃度與胚胎質(zhì)量有顯著相關(guān)性。培養(yǎng)基中的GDF9有潛力成為非侵入性生物標(biāo)記物，用于篩選胚胎。

P-476 卵丘細(xì)胞線粒體DNA拷貝數(shù)與預(yù)后良好的IVF患者的胚胎植入無(wú)關(guān)

作者：Weiwei Liu

研究問(wèn)題

卵丘細(xì)胞（CCs）線粒體DNA（mtDNA）拷貝數(shù)能否作為預(yù)后良好的IVF患者胚胎植入潛力的生物標(biāo)志物？

設(shè)計(jì)

這是一項(xiàng)對(duì)重慶市婦幼保健院生殖醫(yī)學(xué)中心的預(yù)后良好的IVF患者進(jìn)行的前瞻性隊(duì)列研究。研究共收集了61個(gè)周期（包括31個(gè)植入周期和30個(gè)非植入周期）的392個(gè)胚胎，使用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)相應(yīng)胚胎的CCs-mtDNA拷貝數(shù)，并對(duì)植入和非植入胚胎以及高質(zhì)量和低質(zhì)量胚胎的CCs-mtDNA拷貝數(shù)進(jìn)行比較。隨后對(duì)高質(zhì)量和低質(zhì)量胚胎的線粒體功能包括線粒體膜電位，ROS水平和相應(yīng)卵丘細(xì)胞的ATP含量進(jìn)行檢測(cè)和比較，以驗(yàn)證前述比較的發(fā)現(xiàn)。

結(jié)果

同一人群中，植入胚胎和非植入胚胎的平均CCs-mtDNA拷貝數(shù)分別為255.61±81.02和254.50±73.29，高質(zhì)量胚胎和低質(zhì)量胚胎的平均CCs-mtDNA拷貝數(shù)分別為266.02±98.56和295.71±70.64。植入胚胎與非植入胚胎之間、高質(zhì)量胚胎與低質(zhì)量胚胎之間的CCs-mtDNA拷貝數(shù)沒(méi)有差異。高質(zhì)量胚胎與低質(zhì)量胚胎之間的線粒體膜電位，ROS水平和相應(yīng)卵丘細(xì)胞的ATP含量沒(méi)有明顯差異。

結(jié)論

在預(yù)后良好的IVF患者中，檢測(cè)CCs-mtDNA拷貝數(shù)可能對(duì)胚胎優(yōu)先級(jí)次序的決定沒(méi)有任何幫助。CCs-mtDNA拷貝數(shù)與胚胎植入之間的聯(lián)系需要進(jìn)一步的驗(yàn)證。

P-777 利用下一代測(cè)序技術(shù)（NGS）分析胚胎植入前遺傳學(xué)檢測(cè)-非整倍體篩查(PGT-A)中不同活檢方案對(duì)嵌合體比例的影響

作者：Shun Xiong、Jiang Wang、Jun Xia Liu、Wei Han、Jing Yu Li、Guoning Huang

目的

這項(xiàng)研究旨在分析不同活檢方案對(duì)嵌合體囊胚發(fā)生率的影響。

方法

回顧性選取于重慶婦幼保健院行胚胎植入前遺傳學(xué)檢測(cè)-非整倍體篩查(PGT-A) 的115個(gè)活檢周期共474例囊胚為研究對(duì)象。根據(jù)其活檢方法分為兩組：方法1組，對(duì)第3日胚胎行透明帶（ZP）鉆孔，于第5日或第6日行囊胚滋養(yǎng)層（TE）細(xì)胞活檢；方法2組，于第5日或第6日行ZP鉆孔，并于當(dāng)日行TE細(xì)胞活檢。

結(jié)果

方法1組的嵌合體比例為19.58%，顯著高于方法2組（8.12%; P=0.000）。方法1組中整倍體比例略低于方法2組（47.50% vs. 55.13%; P=0.097）。邏輯回歸分析表明活檢方案的選擇與嵌合體比例獨(dú)立相關(guān)。兩種方案的生存率和臨床妊娠率沒(méi)有顯著差異。

結(jié)論

研究獲得了不同活檢方案影響嵌合體比例的證據(jù)。于第3日行ZP鉆孔增加了嵌合體囊胚的發(fā)生率；而于第5日或第6日行ZP鉆孔，嵌合體發(fā)生比例降低，且整倍體比例略高 。我們推薦使用后者進(jìn)行活檢。

P-872 一個(gè)ART周期胚胎移植后應(yīng)用GnRH激動(dòng)劑長(zhǎng)方案和GnRH拮抗劑方案累計(jì)活產(chǎn)率比較：來(lái)自17842名中國(guó)女性的真實(shí)世界數(shù)據(jù)

作者：Jingwei Yang

提出問(wèn)題

不同卵巢刺激方案（GnRH拮抗劑方案和GnRH激動(dòng)劑長(zhǎng)方案）是否會(huì)影響一個(gè)ART周期胚胎移植后的累計(jì)活產(chǎn)率？

研究?jī)?nèi)容

該研究中共有17842位初次接受IVF周期的女性，一次OPU后進(jìn)行移植新鮮胚胎和凍融胚胎。GnRH 激動(dòng)劑（GnRH-a）方案組和GnRH 拮抗劑（GnRH-ant）方案組的基線臨床特征具有顯著差異。一個(gè)完整ART周期后，GnRH-a方案組和GnRH-ant方案組移植胚胎的CLBR分別為10238/16028 (63.88%) 和779/1814 (42.94%)，(OR: 2.25; 95%CI: 2.13-2.59; P<0.001)。對(duì)年齡和獲卵數(shù)進(jìn)行分層分析及COX回歸分析后，首次累積活產(chǎn)率在兩方案的次優(yōu)反應(yīng)者中存在差異，GnRH-ant方案組CLBR低于GnRH-a方案組(P<0.001, 95%CI: 0.39-0.81(Tab1, Fig1)，但在其他卵巢反應(yīng)人群中無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

Tab1

Fig1

在40以下次優(yōu)反應(yīng)人群中，經(jīng)新鮮胚胎移植周期后，GnRH-a方案組與GnRH-ant方案組相比，CLBR升高 (<35y: 68.57% vs. 54.23%; and 35-40y: 39.90% vs. 30.43%, all P<0.05).，但在其他反應(yīng)人群中，累計(jì)活產(chǎn)率無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

在次優(yōu)反應(yīng)人群中，logistic回歸校正相關(guān)協(xié)變量后顯示，ET移植周期中，GnRH-a方案組活產(chǎn)率、累計(jì)活產(chǎn)率高于GnRH-ant方案組，F(xiàn)ET移植周期結(jié)局無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

結(jié)論

在不同的卵巢反應(yīng)患者中進(jìn)行方案優(yōu)化和重新考慮GnRH-ant方案在中國(guó)的使用至關(guān)重要。

黃國(guó)寧教授

黃國(guó)寧教授，主任醫(yī)師，碩士生導(dǎo)師。重慶市婦幼保健院副院長(zhǎng)、生殖中心主任。現(xiàn)任中華醫(yī)學(xué)會(huì)生殖醫(yī)學(xué)分會(huì)主任委員，實(shí)驗(yàn)室學(xué)副組長(zhǎng)，重慶市醫(yī)學(xué)會(huì)生殖醫(yī)學(xué)專業(yè)委員會(huì)主任委員；先后獲得過(guò)衛(wèi)生部中青年突出貢獻(xiàn)專家，全國(guó)先進(jìn)工作者，白求恩獎(jiǎng)?wù)碌葮s譽(yù)稱號(hào)；享受國(guó)務(wù)院特殊津貼。專業(yè)方向：婦產(chǎn)科學(xué)、生殖醫(yī)學(xué)，致力于生殖實(shí)驗(yàn)室的設(shè)計(jì)及規(guī)范化建設(shè)。

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DIP-CN-003193 2020/10/23